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细胞实验室芽孢污染如何杀灭?

更新时间:2023-06-12   点击次数:483次

细胞培养室如何有效避免微生物交叉污染? | 细胞房消毒是一项非常重要的任务,因为它可以预防细胞培养中的污染和交叉感染。细胞培养中常见的生物污染包括细菌芽孢霉菌支原体噬菌体污染等。对实验室进行定期清洁、使用高效型消毒剂是避免细胞培养过程中由于实验室环境引起细胞污染的主要措施
对于细胞培养,污染是最大的敌人,不管是设备、试剂亦或是环境造成的污染,这是每个养细胞的同志所头疼的事情,我们先识别下污染的分类:
细菌芽孢污染
培养细胞受细菌污染后,会出现培养液变混浊,pH改变。污染后细胞发生病理改变,生长不良、胞内颗粒增多、增粗,最后变圆脱落死亡。以白色葡萄球菌较为常见。
真菌污染
培养细胞受真菌污染后,可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点,有的散在生长,培养液一般不发生混浊;倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中,有的呈链状排列。真菌污染后,细胞生长变慢,但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
支原体污染
支原体是没有细胞核结构的原核生物,多吸附于细胞表面或散在于细胞之间,可抑制细胞的代谢和成长,改变核酸合成、影响细胞的抗原性、导致染色体改变等。培养细胞受支原体污染后,由于支原体生长缓慢,开始不易发现。部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢,多数细胞污染后无明显变化。若不及时处理,会产生交叉污染,又因常规培养基中预防细菌和霉菌的抗生素对它没有作用,因此防治支原体的污染非常重要。
噬菌体污
噬菌体是一种寄生于细菌上的病毒,可以感染并破坏细菌。噬菌体污染会对实验结果产生影响,影响实验的可重复性和准确性。此外,噬菌体污染还可能导致实验结果的误解和实验人员的健康威胁。
二细胞培养过程中环境污染途径
1,取放细胞时引起的污染
细胞培养过程中,取放细胞是最基本的操作,培养房开关门的瞬间,环境中的微生物或多或少会进入培养箱中,而且内外温差导致内门冷凝水的产生,极易吸附微生物,都是造成培养箱污染的风险因素。
2,灭菌不到位造成的二次污染
细胞培养过程中,因其它操作问题(如培养基泼洒,水盘污染等),造成培养房的大规模污染也时常会发生,此时就需要对培养箱进行灭菌消毒,常规的消毒(如紫外照射)只能达到表面消毒的效果,特别是对真菌等顽固性污染,无法进行有效灭菌,导致后续培养过程中细胞污染频发。
三传统消毒方式
在传统的细胞房消毒方法中,常用紫外线、高温、酒精等消毒方式。
01、紫外线消毒
紫外线消毒是通过紫外线杀死或去除微生物。
优势:适合无遮挡敞开型环境和空气消毒,能够在短时间内达到杀菌效果。使用成本相对较低,由于不投加化学药剂,不会对水和环境产生影响。
缺点:杀菌效力较低,无法杀灭霉菌(孢子)、芽孢等高抗性微生物。一些被紫外线照射失活的细菌可形成“光复活",另外一些细菌可能存在着“暗复活"现象。紫外线灯套容易结垢,需频繁清洗以维持效果,另外紫外线存在老化问题,要求现场操作人员具备较高技术工艺,及时测定衰减程度并进行校正或更换,无法达到可控、可计量的消毒标准。紫外线不能直接照射人体,所以只能在无人情况下使用。受空间环境因素制约,所以通常作为一种辅助性消毒措施。
02、高温消毒
高温消毒是通过高温杀死或去除微生物。高温消毒有很多优点,例如能够杀死微生物的内部、不会产生化学残留物等。但是,高温消毒也有一些缺点。首先,高温消毒需要使用高温设备,这会增加成本。其次,高温消毒需要一定的时间,因此需要进行计划和安排。最后,高温消毒可能会对一些细胞培养物造成损伤。
03、酒精擦拭消毒
酒精擦拭消毒是常见的一种消毒方法,但酒精易挥发,不稳定。只能用于物体表面消毒,其消毒主要针对普通细菌,对高抗性的芽孢、霉菌等无效。
70%-75%乙醇优势是对细菌具有较好的杀灭作用,但对真菌的效力有限,可以使用奥克泰士来解决乙醇无法较好解决的酵母、霉菌、芽孢的污染问题。
对于细胞培养实验室来说,最重要的是杜绝一切可能的污染源。
四如何有效避免污染
1.重视细胞房管理工作,规范操作
定期进行细胞房清洁消毒工作,规范实验人员操作(如身着白大褂、换鞋等),创造洁净培养环境。
2.避免频繁查看细胞
做好实验规划,减少培养箱门开关的频率,取放细胞时需佩戴洁净的手套,并用少量的 70% 医用酒精(过多会导致培养箱中残留乙醇蒸汽)擦拭培养瓶/皿表面,从而降低细胞培养箱污染的风险;
3.定期维护和灭菌,预防污染
定期清洁维护,培养箱内用水灭菌后使用并定期更换,选择培养箱时,可优先考虑有自动灭菌功能的培养箱。细胞房一旦发生污染,及时进行消毒灭菌工作。
奥克泰士高效型杀孢子剂,满足洁净区和实验室的苛刻灭菌要求:
01)快速高效杀灭芽孢、霉菌等高抗性微生物,
02)全面杀灭真菌、细菌、病毒等各种类型的微生物。
03)食品级生态型,无色无味,呵护员工职业健康。
04)良好的材料兼容性,基本无腐蚀,适用于金属、橡塑等各种材料。同时,作用完毕后分解物只有水和氧气,使用安全,没有刺鼻气味,环保型杀孢子剂。